06.12.2021

Фото стрижек на средние волосы каскад: 2021 (+150 фото) Стрижка каскад на длинные волосы с чёлкой современные прически

Содержание

Модные женские стрижки 2022 на короткие, средние и длинные волосы. Фото трендовых стрижек с названиями

Стрижка и цвет — это основы стиля любой женщины!

Женские стрижки сезона 2022 отличаются легкой укладкой, естественностью, акцентом на здоровье волос и творческим подходом. В 2022 году любая девушка сможет выбрать себе подходящий цвет волос или стрижку. Самые модные тенденции сезона:

  1. Подчеркивание природной структуры волос. Например, если волосы вьющиеся, то стоит выбирать стрижки на основе каскада, многослойные, которые будут подчеркивать ваши локоны. Если волосы прямые выбирайте стрижки с прямым срезом или асимметричные.
  2. Модным трендом стрижек на короткие, средние и длинные волосы в 2022 году будет еще большая многослойность.
  3. Смещение акцентов в стрижке — еще один модный тренд сезона.
  4. Разнообразие челок. 2022 год называют годом стрижек с челкой.

Когда вы думаете о новой стрижке, нужно задать себе несколько ключевых вопросов. Подойдет ли эта стрижка к моему типу волос и форме лица? Подойдет ли она моему образу жизни? И конечно же, в тренде ли будет эта стрижка?

Основными факторами, влияющими на выбор модной стрижки, являются структура волос и форма лица. Не лишним также будет обратить внимание на густоту и состояние волос. Именно эти нюансы помогут определиться не только с модной, но и очень стильной стрижкой, которая сможет подчеркнуть ваш индивидуальный стиль и образ.

  1. Овальная форма лица. Этой форме лица подходит практически любая стрижка. Вы можете смоделировать любую прическу, используя различные варианты.
  2. Квадратная форма лица. Для сглаживания уголков рекомендуются косые и рваные пряди. Подойдут любые формы с асимметрией, которые стилисты часто используют на короткие и средние волосы. Обратите внимание на каскадные и многослойные стрижки.
  3. Прямоугольная форма.  Проблема такая же, как и с квадратной формой. Каскадная или многослойная стрижка хорошо сгладит все острые углы. Не подходят прямые челки и любые стрижки с четкими линиями, как например, каре. Желательно выбирать стрижку с асимметрией или каскадными прядями.
  4. Ромбовидная форма лица. К такой форме лица подходят практически все женские стрижки, кроме объемных. Длина прядей должна заканчиваться примерно на уровне скул, что поможет визуально разгладить их иголки. Подойдут различные вариации с густой и косой челкой.
  5. Круглое лицо. С такой формой рекомендуется быть поосторожнее, и выбирать менее пышные стрижки. Чтобы сбалансировать все пропорции лица, стилисты рекомендуют придать объем нижней части. С этим хорошо справятся асимметричная челка или пробор.

Обратитесь за помощью к парикмахеру, чтобы подобрать стрижку, которая лучше всего подходит вашей форме лица.

Короткие женские стрижки 2022: фото новинки и модные тенденции

Короткие стрижки сезона 2022 имеют одну общую черту — они короткие по длине. Короткие стрижки подчеркивают ваши уникальные черты лица, в отличие от длинных (красивые скулы, глаза, шею). Каждая стрижка на короткие волосы выглядит уникальной. Короткая стрижка придает женщине особый шарм, это выражение ее индивидуальности и стиля.

Причина, по которой большинство людей предпочитает короткую прическу, заключается в том, что с ней очень легко справиться. Короткие женские стрижки очень стильные и модные в 2022 году, обратите внимание на каре, пикси, боб, гарсон.

Стильное каре 2022

Стрижка каре давно получила статус классической. В новом сезоне 2022 стилисты предлагают множество вариантов каре, которые не только разнообразят образ, но и придадут ему особый неповторимый характер.

Короткая женская стрижка каре выглядит одновременно и строго, и непринужденно. Ее особенности — четкий крой и прямые линии, без рваных и филированнных концов.

Актуальные виды каре 2022:

  • Классическое каре
  • Многослойное каре
  • Длинное каре
  • Короткое каре
  • Боб-каре
  • Каре-каскад

Современное каре может быть с челкой или без нее. Если вы хотите быть в тренде в 2022 году, смело выбирайте каре — такой стиль никогда не устареет!

Стрижка боб: фото 2022

Женская стрижка боб — это еще одна вневременная классика, которая отлично смотрится на женщинах всех возрастов, с любой формой лица и типом волос.

Стрижка боб отличается от каре округлой формой и большим объемом на затылке. Передние пряди намного длиннее задних, могут доходить даже до плеч. Асимметричная форма стрижки скрывает недостатки лица, зрительно удлиняет его. А многослойность стрижки делает ее универсальной, так как она подходит и для тонких волос и для густых вьющихся.

Стрижка Боб сезона 2022 характеризуется короткой и средней длиной прядей с прямыми или слегка изогнутыми кончиками волос на уровне подбородка и челюсти.

Женская стрижка пикси 2022

Стрижка пикси продолжает оставаться в тренде нового сезона, это модная женская стрижка 2022 года, которая покорила миллионы женщин во всем мире. Она удобна, потому что требует минимум ухода, и вы можете укладывать ее совершенно по-разному.

Модная стрижка пикси 2022 — это прическа с короткими волосами сзади, сбоку и челкой с слегка перекрывающимися длинными передними волосами. Для тех женщин, которые не боятся экспериментировать с внешностью, отлично подойдет вариант стрижки с косой, слегка удлиненной челкой в 2022 году. Такая форма отлично подчеркнет овал лица и сделает линию глаз более выразительной.

Единственный минус: стрижка пикси требует регулярного посещения парикмахерской (каждые 4-6 недель).

Женская стрижка гарсон

Гарсон — это еще один тренд 2022 года, который заставит вас выглядеть очень стильно. Косая рваная челка длиннее самой стрижки придаст интересную форму прическе. Этот мальчишеский крой можно носить в любое время года.

Стрижка гарсон выполняется с помощью градуирования, а плавных переходов и четких линий можно добиться с помощью филировки. Стрижка идеально подходит обладательницам прямых волос, а вот для волнистых волос следует выбирать удлиненный вариант стрижки. Стрижка гарсон лучше всего смотрится на худых девушках с выразительными чертами лица.

Актуальные виды стрижки гарсон 2022:

  • Классический гарсон
  • Удлиненный гарсон
  • Короткий гарсон
  • Стрижка гарсон с рваными прядями

Женская стрижка андеркат

Стрижка андеркат популярна не только у мужчин, но и у женщин, это отличный способ подчеркнуть свою индивидуальность. Стрижка довольно короткая на затылке и висках (иногда сбривается), а более длинные волосы остаются на макушке.

Стрижка андеркат с выбритым виском не теряет актуальности в этом сезоне, для самых стильных и эпатажных девушек, не боящихся привлечь к себе внимание. В такой стрижке можно сбрить одну или две стороны.

Стрижка андеркат имеет множество вариантов, играя с длиной и текстурой, ее можно адаптировать как для тонких, так и для густых, жестких и даже волнистых волос в 2022 году.

Модные стрижки на волосы средней длины: тренды 2022

Средние волосы всегда выглядят женственно и нежно, при этом не требуют много времени на укладку. Стилисты в сезоне 2022 предлагают расширить выбор классических моделей, разнообразив их подстриженной челкой и модными слоями. Чтобы придать образу изюминку, можно не только изменить классическую форму, но и добавить креативности, используя модные техники окрашивания волос.

Каре на средние волосы: фото 2022

Каре также является отличным решением для волос средней длины. Сегодня стилисты подбирают удачные виды каре для разных типажей внешности и типа волос, что делает стрижку универсальной и модной вне времени. Правильно подобранное каре способно придать объем тонким волосам, за счет многослойности и придать нужную форму густым непослушным волосам.

Если вы хотите немного измениться в 2022 году, но еще не готовы к короткой стрижке, длинное каре — идеальный переход к более короткой стрижке, при этом не слишком резкий. С длинным каре вы сможете без проблем делать разные виды укладки и прически.

Стрижка каскад на средние волосы: тренды 2022

Стрижка каскад способна подчеркнуть любой образ в 2022 году. Подходит как для прямых, так и для волнистых волос. При выборе подходящего варианта стилисты рекомендуют обращать внимание на форму овала лица. Стрижка каскад подходит практически к каждому типу лица и если правильно выбрать форму, то с помощью нее можно подкорректировать черты лица и сделать акцент на скулах или глазах.

Стрижка каскад довольна сложная, поэтому обращайтесь к опытному мастеру. Модный каскад сезона 2022 — это более мягкие переходные линии и слои, которые начинаются не от самой макушки, а значительно ниже по длине. Иногда переходы выполняются только на кончиках волос. Каскад отлично смотрится с челкой, обратите внимание на удлиненную челку, челку-занавес, прямую, асимметричную.

Каскад выбирают те, кто не хочет тратить слишком много времени на укладку, ведь стрижка требует минимального ухода.

Многослойные стрижки на средние волосы 2022

Многослойная стрижка на средние волосы 2022 позволяет сохранить общую длину волос, но в тоже время помогает изменить образ. Чтобы получилась стильная многослойная стрижка, которая подойдет именно вам, нужно обязательно приложить руку профессионала, существует несколько различных техник создания слоев, и каждая дает свой эффект: добавить объем или наоборот гладить жесткость грубых волос, визуально добавить густоты или облегчить тяжесть волос.

Главная суть многослойной стрижки заключается в том, что слои плавно переходят друг в друга, образуя аккуратный многослойный край прически, которая смотрится очень красиво даже без укладки.

Основные преимущества многослойной стрижки на средние волосы:

  • Подходит для всех типов волос (прямые, вьющиеся, жесткие, тонкие).
  • Создает динамику и оживляет ровные пряди.
  • Уравновешивает резкие очертания лица с четкой геометрией: треугольник, квадрат и прямоугольник.
  • Практически не меняет длину волос.
  • Легко поддается  укладке.

Женские стрижки на длинные волосы: фото 2022

Длинные стрижки 2022 года могут быть очень привлекательными и роскошными в зависимости от длины и вида прически. У длинных причесок есть фактор консервативного стиля, который сделал их популярными на протяжении всей истории и даже сейчас.

Как и в предыдущие годы, длинные волосы продолжают оставаться на пике популярности. Модные тенденции коснулись не только укладки, но и разнообразия стрижек, которые позволяют придать своей форме необходимый объем и текстуру, что так модны в 2022 году.

Стрижка каскад на длинные волосы 2022

Самый модный тренд в стрижках на длинные волосы 2022 года — каскад в различных вариантах исполнения.

Каскад — лучший выбор для волос максимальной длины. Эта стрижка остается самой востребованной среди обладательниц длинных локонов. Главный ее принцип — постепенное изменение длины прядей от макушки к кончикам.

Грамотный мастер может скорректировать с помощью этой стрижки и удлиненную форму лица, и круглую, и треугольную, и квадратную, приблизив ее к идеальной овальной форме, всего лишь с помощью стрижки.

Преимущества стрижки каскад на длинные волосы:

  • Подходит к любой форме лица
  • Делает толстые жесткие пряди легкими и структурированными.
  • Делает тонкие волосы визуально гуще и объемнее
  • Подчеркивает красоту и акцентирует внимание на цветовых оттенках стильного окрашивания омбре, шатуша и балаяж.
  • Дает возможность создавать красивые прямые, волнистые и кудрявые укладки.

Многослойные стрижки на длинные волосы: модные тенденции 2022

Многослойные стрижки на длинные волосы в 2022 году показали, что они хорошо сочетаются с любой формой лица. Это делает стиль гибким и адаптируемым в зависимости от типа волос и их структуры. Слои придадут волосам больше текстуры и объема. Многослойные стрижки всегда выглядят очень стильно и визуально придают волосам ухоженный вид.

Слои в стрижке накладываются друг на друга, создавая объем и текстуру прически, что очень актуально для длинных волос.

Многослойную стрижку часто путают с каскадной, на самом деле они похожи. Главное их сходство в том, что локоны в стрижке бывают разной длины. Однако есть существенная разница: каскад имеет резкие заметные переходы между прядями, а многослойные стрижки имеют плавные ступенчатые переходы, которые едва заметны. В многослойных стрижках градуируются только края прически.

Любая многослойная стрижка на длинные волосы сезона 2022 добавляет текстуру волосам и упрощает ежедневную укладку.

Стрижка с ровным срезом на длинные волосы

Ровная стрижка — одна из самых востребованных стрижек на длинные волосы и имеет ряд преимуществ. Во-первых, именно такая прическа придает кончикам дополнительный объем, визуально делает волосы гуще и тяжелее. Во-вторых, прямой крой смотрится очень стильно и аккуратно. В-третьих такая стрижка выглядит потрясающе на прямых длинных волос и она всегда будет в тренде, независимо от времени года и сезона.

Стрижка лисий хвост на длинные волосы

Модная стрижка получила название «лисий хвост» через свою форму. Особенность этой формы в том, что срез срезается под острым углом, после чего его края обрамляются филировкой. Отлично подходит для гладких и густых, а также пышных и вьющихся длинных волос. Именно на длинных волосах эта стрижка смотрится лучше всего, потому что на средних волосах, она не будет иметь желаемой формы и будет выглядеть скудно.

Стрижка, которая добавит объем и текстуру волосам, не убирая длину ваших локонов. Легкая небрежность придает прическе дополнительный объем и кокетливую игривость, что так модны в 2022 году.

Длинные стрижки с челкой

В 2022 году в моде длинные стрижки с челкой. Челка — еще один модный тренд, вошедший в моду с 70-х годов.

Актуальные виды челки сезона 2022:

  1. Удлиненная челка
  2. Челка-занавес
  3. Прямая челка
  4. Косая челка
  5. Укороченная челка

Если вы любите челку, но не очень любите обилие волос перед глазами, то вы оцените челку-занавес. Она подчеркивает форму глаз и отлично маскирует все недостатки, особенно что касается возрастных изменений.

Челка дает вашему стилю возможность обрамить ваше лицо без необходимости стричь все волосы. Длинные прямые волосы с челкой добавляют объема и текстуры прическе. Такой эффект может иметь челка любой длины, от укороченной челки до челки с пробором и челки-занавес.

Удлиненная челка на бок помогает выигрышно подчеркнуть достоинства внешности и подходит к любой форме лица. При необходимости с помощью челки на одну сторону, постепенно переходящей в стрижку, можно скорректировать любые недостатки внешности. На средние и длинные волосы лучше всего выбирать удлиненный вариант челки.

Модные стрижки для старших женщин: фото 2022

Для женщин старше 40, 50 лет выбор правильной стрижки очень важен. В 2022 году обратите внимание на такие виды стрижек:

  1. Каре длиной до подбородка всегда будет хорошим выбором, потому что его можно подогнать под любую форму лица, а также разнообразит трендовым окрашиванием.  Такая стрижка идеальна в любом возрасте, но особенно хороша она для женщин старше 50 лет, так как сильно омолаживает и придает волосам объем и текстуру.
  2. Боб может полностью преобразить ваш образ и стиль. Стрижка боб бывает разной длины и объема. С несколькими слоями вы получите привлекательный объем по бокам, который хорошо сочетается с добавленной высотой сверху. А красивая длинная косая челка добавляет кокетливости, которая смягчает длинное или круглое лицо.
  3. Женщины разного возраста предпочитают стрижку каскадом, и не зря, потому что она имеет массу преимуществ. Главное преимущество, которым обладает каскадная стрижка, в том, что ее можно выполнять как на длинных, так и на коротких волосах.
  4. Многослойная стрижка будет отличной идеей, если вам хочется изменить свой образ в 2022 году и быть в тренде. Добавляя слои стрижке для женщин после 40, можно придать образу форму, объем и текстуру.

Фото актуальных женских стрижек 2022

Кто бы что не говорил, но для женщины стрижка играет очень важную роль, независимо от возраста, статуса и образа жизни. Мы подготовили для вас модные фото новинки актуальных женских стрижек на короткие, средние и длинные волосы сезона 2022:

Выбирайте подходящий вариант стрижки, вдохновляйтесь и меняйтесь!

Каскадные стрижки на средние волосы (65 фото)

1

Шарлиз Терон стрижка Каскад


2

Каскадная стрижка на средние волосы без челки


3

Стрижка Каскад на средние волосы волнистые и пушистые


4

Стрижка Каскад а на средние волосыа без челки


5

Рапсодия Каскад лесенка


6

Стрижка Каскад на средние волосы без челки


7

Стрижка полудлинный Каскад


8

Стрижка Каскад лесенка на средние


9

Каскад Шегги


10

Стрижки на редкие волосы


11

Женские стрижки на средние волосы Каскад без челки на средние волосы


12

Стрижка дикарка на средние волосы с челкой


13

Стрижка рапсодия


14

Стрижки на волосы средней длины


15

Стрижка рапсодия с каскадом


16

Стрижка полудлинный Каскад


17

Стрижка Каскад Гаврош на средние волосы


18

Каскад стрижка Каскад


19

Стрижки дебют Каскад Боб


20

Стрижка рапсодия


21

Стрижка Каскад на средние волосы с челкой мелирование


22

Стрижки на длительный волос


23

Стрижка Каскад лесенка на средние волосы с челкой


24

Прическа на каскадную стрижку


25

Каскад на средние волосы и рванка


26

Стрижка Каскад на средние волосы с челкой


27

Стрижки каре удлиненное градуированное с челкой


28

Каскад итальянка


29

Стрижка Каскад фото


30

Стрижки типа Каскад на средние волосы


31

Стрижка Каскад лесенка на средние


32

Каскад с филированной челкой


33

Каскад лесенка филировка


34

Каскад прическа на длинные без челки


35

Каскад рапсодия и Аврора стрижки


36
37

Каскад 6а средние волосы


38

Каскад итальянка рапсодия


39

Стрижка итальянский Каскад


40

Стрижка Каскад.музыкальные клипы


41

Красивая стрижка Каскат


42

Прически на стрижку Каскад средние волосы


43

Стрижка Каскад лесенка на средние волосы с челкой


44

Каскад с филированной челкой


45

Каскад рапсодия лесенка стрижки


46

Стрижки женские на средние волосы Каскад без челки


47

Стрижки женские на средние волосы


48

Стрижка рапсодия на средние волосы


49

Двухуровневый Каскад


50

Стрижка Каскад лесенка на средние волосы с челкой


51

Многоступенчатая стрижка на средние волосы


52

Стрижка Каскад на средние волосы с косой челкой


53

Стрижки дебют Каскад Боб


54

Стрижка- Каскакад градуированное


55

Многоуровневые стрижки на средние волосы


56

Каскад рапсодия лесенка стрижки


57

Стрижка Каскад на средние волосы фото


58

Стрижки женские на длинные волосы с челкой для круглого лица


59

Стрижка Каскад лесенка на средние волосы с челкой


60

Стрижки женские на длинные волосы


61

Стрижка полудлинный Каскад


62

Стрижка Каскад на полудлинные волосы


63

Разновидности каскада на средние волосы


64

Каскад лесенка волчица


65

Стрижка рванка на средние волосы

Каскад – идеальная стрижка на средние волосы 2019-2020: модные варианты, 40 фото

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

  • Каскад – идеальная стрижка на средние волосы instagram.com

Английский мастер Видал Сассун в далеких 60-х подарил миру не только ультрамодную стрижку сессон, но и каскад.

Стрижка каскад в последние годы стала безумно популярной. Любовь женщин к стрижке каскад стилисты объясняют тем, что волосы не сильно состригают, что чаще всего дам пугает. Каскад практически не затрагивает основную длину волос, а лишь корректирует пряди.

В сезоне осень-зима 2019-2020 женская стрижка каскад – самый подходящий вариант для тех, кто любит локоны чуть длиннее плеч или по плечи, но при этом не может тратить много времени на уход, прическу и укладку.

Стрижка каскад отличается универсальностью, то есть это идеальная длина, подходящая всем возрастам, типам, формам лица и комплекциям.

Главред собрал самые последние варианты стрижки каскад из Instagram.

Стрижка каскад осень-зима 2019-2020: особенности

Средний каскад — очень практичный вид стрижки, который позволяет сохранить общую длину волос, но в тоже время помогает изменить образ. Только не перепутайте каскад со стрижкой лесенка, и обязательно уточните своему мастеру, что именно вы хотите.

Стрижка каскад осень-зима 2019-2020: модные варианты

Двойной на средние волосы – идеальное решение для обладательниц острого подбородка и тех, кто хочет откорректировать овал лица. Лучше варианта и не придумаешь!

Стрижка каскад с челкой – это классический вариант плюс косая челка, но ни в коем случае не прямая! При этом учтите, если у вас густые волосы, челка будет лишней — визуально она только увеличит голову.

Рваный каскад, как правило, выбирают дерзкие девушки, а также школьницы.

И об укладке. В сезоне осень-зима 2019-2020 модный каскад – это волнистые пряди, локоны и разнообразные завитушки. Не бойтесь проявлять фантазию, и будете выглядеть шикарно.

Читайте такжеБоб — самая модная стрижка 2019-2020, которая подходит всем женщинам – 30 фотоНапомним, ранее сообщалось, каре – самая модная стрижка на средние волосы 2019-2020. Стрижка каре на средние волосы 2019-2020 – это каре в классическом и усовершенствованном варианте: градуированное каре, асимметричное каре, каре в стиле гранж, и каре с различными челками. Кроме того, стрижка каре на средние волосы универсальна, и подходит всем женщинам. Другое дело, что такая стрижка требует ежедневной укладки.

border-radius — CSS: Каскадные таблицы стилей

Свойство CSS border-radius округляет углы внешней границы элемента. Вы можете задать один радиус, чтобы образовать круглые углы, или два радиуса, чтобы сделать углы эллиптической формы.

Радиус применяется ко всему фону , даже если элемент не имеет границы; точное положение отсечения определяется свойством background-clip .

Свойство border-radius не применяется к элементам таблицы, когда border-collapse равно collapse .

Примечание: Как и любое сокращенное свойство, отдельные вложенные свойства не могут наследовать, например, в border-radius: 0 0 наследуется наследование , что частично переопределяет существующие определения. Вместо этого должны использоваться отдельные свойства от руки.

Это свойство является сокращением для следующих свойств CSS:

 

радиус границы: 10 пикселей;


радиус границы: 10 пикселей 5%;


радиус границы: 2px 4px 2px;


радиус границы: 1px 0 3px 4px;



радиус границы: 10 пикселей / 20 пикселей;


радиус границы: 10 пикселей 5% / 20 пикселей 30 пикселей;


радиус границы: 10px 5px 2em / 20px 25px 30%;


радиус границы: 10px 5% / 20px 25em 30px 35em;


граница-радиус: наследовать;
радиус границы: начальный;
граница-радиус: вернуться;
граница-радиус: не задано;
  

Свойство border-radius указано как:

  • одно, два, три или четыре <длина> или <процент> значений.Используется для установки единого радиуса для углов.
  • , за которым необязательно следует «/» и одно, два, три или четыре значения <длина> или <процент> . Это используется для установки дополнительного радиуса, чтобы вы могли иметь эллиптические углы.

Значения

<длина>

Обозначает размер радиуса окружности или большой и малой полуосей эллипса с использованием значений длины. Отрицательные значения недопустимы.

<процент>

Обозначает размер радиуса окружности или большой и малой полуосей эллипса в процентах. Проценты по горизонтальной оси относятся к ширине поля; проценты по вертикальной оси относятся к высоте прямоугольника. Отрицательные значения недопустимы.

Например:

  border-radius: 1em / 5em;


граница-верх-левый-радиус: 1em 5em;
граница-верх-правый-радиус: 1em 5em;
граница-нижний-правый-радиус: 1em 5em;
граница-нижний-левый-радиус: 1em 5em;
  
  радиус границы: 4px 3px 6px / 2px 4px;


граница-верх-левый-радиус: 4px 2px;
граница-верх-правый-радиус: 3px 4px;
граница-нижний-правый-радиус: 6px 2px;
граница-нижний-левый-радиус: 3px 4px;
  
  
граница: сплошная 10 пикселей;
радиус границы: 10 пикселей 40 пикселей 40 пикселей 10 пикселей;
  
окантовка: бороздка 1em красная;
радиус границы: 2em;
  
фон: золото;
бордюр: хребет золото;
радиус границы: 13em / 3em;
  
граница: нет;
радиус границы: 40 пикселей 10 пикселей;
фон: золото;
  
граница: нет;
радиус границы: 50%;
фон: бурливуд;
  
граница: пунктирная;
ширина границы: 10 пикселей 4 пикселя;
радиус границы: 10 пикселей 40 пикселей;
  
граница: пунктирная;
ширина границы: 2px 4px;
радиус границы: 40 пикселей;
  
  pre {
  маржа: 20 пикселей;
  отступ: 20 пикселей;
  ширина: 80%;
  высота: 80 пикселей;
}

pre # example-1 {
  граница: сплошная 10 пикселей;
  радиус границы: 10 пикселей 40 пикселей 40 пикселей 10 пикселей;
}

pre # example-2 {
  окантовка: бороздка 1em красная;
  радиус границы: 2em;
}

pre # example-3 {
  фон: золото;
  бордюр: хребет золото;
  радиус границы: 13em / 3em;
}

pre # example-4 {
  граница: нет;
  радиус границы: 40 пикселей 10 пикселей;
  фон: золото;
}

pre # example-5 {
  граница: нет;
  радиус границы: 50%;
  фон: бурливуд;
}

pre # example-6 {
  граница: пунктирная;
  ширина границы: 10 пикселей 4 пикселя;
  радиус границы: 10 пикселей 40 пикселей;
}

pre # example-7 {
  граница: пунктирная;
  ширина границы: 2px 4px;
  радиус границы: 40 пикселей;
}
  

Живые образцы

Таблицы BCD загружаются только в браузер

Масштабируемые каскады экспрессии генов на основе рекомбиназы

Кассета генных пертурбаций (GPC): модуль экспрессии генов на основе рекомбиназы

Каждый модуль выполняет две задачи: (1) экспрессия гена (ов) полезной нагрузки и (2) самоограничение экспрессии гена (ов) полезной нагрузки, за которым следует экспрессия следующего гена (ов) полезной нагрузки, в ответ на индуктор (рис.1а). Для реализации этих функций мы разработали компактную генную цепь на основе рекомбиназы, названную GPC (рис. 1b). GPC состоит из трех частей: (1) расщепленная рекомбиназа, которая активируется в ответ на химически индуцированную димеризацию (CID) гиббереллином (GIB) или абсцизовой кислотой (ABA) 11,12,13 , (2) геном полезной нагрузки. (s) экспрессируются в том же транскрипте мРНК, что и расщепленная рекомбиназа и терминатор, и (3) сайты узнавания рекомбиназы, фланкирующие все генетические элементы GPC. Поскольку конститутивно активный промотор расположен выше GPC, расщепленная рекомбиназа и ген полезной нагрузки экспрессируются до тех пор, пока родственный лиганд не активирует рекомбиназу, которая иссекает весь родственный GPC.Это прекращает активность рекомбиназы и экспрессию гена (ов) полезной нагрузки и приводит к экспрессии следующего нижестоящего GPC. Этот дизайн представляет собой прогресс в масштабируемости программных каскадов экспрессии генов, поскольку временная экспрессия генов может быть вызвана простым чередованием воздействия на клетки всего двух лигандов (лиганд №1 для этапов с нечетным номером и лиганд №2 для этапов с четным номером. этапы). Длина каскада экспрессии генов ограничена только количеством ортогональных рекомбиназ; к настоящему времени подтверждена активность почти дюжины ортогональных рекомбиназ в клетках млекопитающих 10 .Кроме того, эта архитектура дополнительно минимизирует клеточную нагрузку, поскольку в любой момент времени экспрессируются только ген (ы) рекомбиназы и полезной нагрузки в проксимальном GPC.

Рис. 1: Дизайн и проверка кассеты генных пертурбаций (GPC).

a Схема однокомпонентного GPC (слева) и тандемной схемы GPC для программирования каскадов экспрессии генов (справа). b Один GPC обеспечивает переключение экспрессируемого гена с GFP на BFP. Красные стрелки указывают на праймеры, использованные для обнаружения события вырезания в e .EFSp: короткий промотор EF1a человека. c Типичный график проточной цитометрии для клеток, трансфицированных единой архитектурой GPC, описанной в b , реализованных с указанной расщепленной рекомбиназой и обработанных указанными лигандами в течение 24 часов. d Количественная оценка результатов c ( n = 3, среднее ± стандартное отклонение). % BFP + / (% BFP + или GFP +) указывает фракцию клеток, подвергшихся рекомбинации. e ПЦР-проверка удаления после обработки лигандом с использованием праймеров, обозначенных красными стрелками в b .Исходные данные представлены в виде файла исходных данных. G: GIB, A: ABA.

Индивидуальные GPCs были оптимизированы путем их реализации в простом двухступенчатом каскаде, который переключает экспрессию с GFP (стадия 1) на BFP (стадия 2) после обработки лигандом и удаления GPC (рис. 1b). Сплит-интегразы Cre, PhiC31 и Flp были расщеплены в определенных сайтах, которые дают наивысшее отношение сигнал / шум, определяемое как отношение индуцированных эксцизией BFP-позитивных клеток в присутствии и в отсутствие лиганда CID (дополнительный рис.1а). Затем мы добавили к этим белкам дополнительный сигнал ядерной локализации для дополнительной активности рекомбиназы (дополнительный рис. 1b). Кроме того, мы выбрали сигнал полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (BGHpA) в качестве наиболее эффективного сигнала полиаденилирования для размещения в конце каждого GPC, чтобы блокировать негерметичную экспрессию нижележащих GPC (дополнительный рис. 1c). Оптимизированные GPC, включая GIB-активированный Cre (GIB-Cre), GIB-активированную интегразу PhiC31 (GIB-PhiC) и ABA-активированный Flp (ABA-Flp), имели отношение сигнал / шум 80–792 в клетках HEK293T. (Инжир.1в, г). Мы подтвердили, что CID от GIB и ABA ортогональны друг другу (рис. 1c, d). Переключение гена полезной нагрузки с GFP на BFP происходило из-за активности рекомбиназы, поскольку GPC с неактивным мутантом Cre (Cre Y324F) 14 не смог переключить экспрессированный ген на BFP (рис. 1c, d). Зависимое от эксцизии переключение гена полезной нагрузки было подтверждено обнаружением продукта ПЦР, специфичного для эксцизии (рис. 1e).

Тандемный GPC обеспечивает надежный каскад экспрессии генов

Затем мы разработали каскад экспрессии генов, состоящий из тандемного массива GPC (рис.2a):

$$ {\ rm {GIB}} \! — \! {\ Rm {Cre}} \ to {\ rm {ABA}} \! — \! {\ Rm {Flp}} \ to { \ rm {GIB}} \! — \! {\ rm {PhiC}} $$

Рис. 2: Разработка и проверка тандемной генной цепи GPC.

a Тандемная генная цепь GPCv2-Fluor, используемая в b – d . Чередование обработок GIB и ABA приводит к удалению GPC и переключению гена полезной нагрузки с BFP на GFP, на mCherry и, наконец, на iRFP720. Ген устойчивости к зеоцину помещают в GIB-Cre GPC для положительного отбора генной цепи.CAGp: гибридный промотор, состоящий из раннего энхансера цитомегаловируса (CMV), промотора бета-актина цыпленка и акцептора сплайсинга бета-глобина кролика, P2A: саморасщепляющихся пептидов тешовируса-1 2A свиньи. b Типичный график проточной цитометрии клеток HEK 293T, несущих тандемный GPCv2-Fluor, обработанных указанной последовательностью лигандов CID. Графики проточной цитометрии для всех соответствующих каналов и схем гейтирования представлены на дополнительном рисунке 3a. c Количественная оценка средней флуоресценции и средней доли клеток, экспрессирующих указанный флуоресцентный белок на каждой стадии каскада экспрессии гена ( n = 3, среднее ± s.д.). d Количественная оценка средней флуоресценции и средней доли клеток, экспрессирующих указанный флуоресцентный белок после каждой указанной последовательности обработки лигандом ( n = 3, среднее ± стандартное отклонение). Графики проточной цитометрии для всех соответствующих каналов и схем гейтирования представлены на дополнительном рис. 3b. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Экспрессировался только GPC, расположенный непосредственно проксимальнее вышестоящего промотора, что согласуется с нашим первоначальным дизайном на рис.1а. Таким образом, начальная обработка GIB, которая активировала GIB-Cre в первом GPC, не вырезала GIB-PhiC GPC ниже по течению, потому что GPC ниже по течению не были первоначально экспрессированы; эта особенность архитектуры позволяет снова использовать GIB на этапе 3 (GIB-PhiC GPC) в том же каскаде. Эта тандемная генная цепь GPC является самодостаточной для запуска каскада экспрессии генов и не требует каких-либо предварительно интегрированных сайтов распознавания рекомбиназы. Эта функция, в принципе, позволяет быстро внедрить тандемный GPC в любой интересующий тип клеток путем простой интеграции генной цепи.

Затем мы проверили, как быстро лиганды CID могут вызывать вырезание в GPC. Обработка GIB вызвала почти полное удаление GPC в течение 24 часов; небольшое дополнительное иссечение произошло при более длительной терапии GIB (дополнительный рис. 2a). Чтобы обеспечить достаточную экспрессию следующего гена и деградацию предыдущего гена в каскаде, мы обрабатывали клетки лигандом CID в течение 48 часов для каждой стадии в каскаде.

Мы также исследовали скорость, с которой лиганды удалялись из клеток, чтобы определить минимальный временной ход, необходимый для переключения между лигандами.Молекула GIB, наиболее часто используемая для CID в клетках млекопитающих, представляет собой модифицированный ацетоксиметильной группой гиббереллин A3 (GA3-AM) 12 , который может быть захвачен внутри клеток путем удаления ацетоксиметильной группы внутриклеточной эстеразой. Другие GIB, такие как GA4, известны как проницаемые для дрожжевой мембраны без какой-либо модификации 15 и могут легко диффундировать из клеток после удаления лиганда. Как и ожидалось, GA3-AM потребовалось более 12 часов для полного выведения из клеток, тогда как GA4 немедленно удалялся из клеток после удаления лиганда (дополнительный рис.2б, в). Более того, системы расщепленной рекомбиназы, индуцированные GA4, были столь же эффективны, как и системы, индуцированные GA3-AM (дополнительный рис. 2c). Впоследствии мы использовали GA4 для управления каскадом экспрессии генов в тандемных генных цепях GPC на протяжении всего исследования. Мы аналогичным образом протестировали кинетику клиренса АБК и обнаружили, что клетки практически не содержали АБК через 12 часов после удаления лиганда (дополнительный рис. 2с). Таким образом, мы использовали график обработки лигандом из 48 часов на каждой стадии в пределах каскада с 12-часовым перерывом между переключениями лигандов.

Иссечение рекомбиназами оставляет рубцовую последовательность, состоящую из сайтов узнавания рекомбиназы (дополнительный рис. 2d). Следовательно, в нашем исходном тандемном GPC (версия 1), где стартовый кодон был помещен в каждый GPC, последовательное вырезание тандемного массива GPC неизбежно приводит к удлинению рубца перед экспрессируемым GPC. Более длинные рубцы в 5′-нетранслируемой области (5’UTR) могут образовывать вторичные структуры, которые влияют на эффективность трансляции 16 . Чтобы решить эту проблему, мы создали тандемный GPC версии 2 (дополнительный рис.2e) с инициирующим кодоном и последовательностью Козака между промотором и GPC, так что рубцовая последовательность не вносит вклад в 5’UTR, но фактически транслируется. Саморасщепляющаяся последовательность 2А была добавлена ​​к 5′-концу каждого расщепленного гена рекомбиназы, чтобы уменьшить вероятность того, что полипептид из рубцовой последовательности будет мешать CID или активности рекомбиназы. В соответствии с нашими ожиданиями, версия 2 тандемной генной цепи GPC имела лучшую эффективность удаления, чем версия 1, давая более устойчивый каскад экспрессии генов (дополнительный рис.2д). Все каскады экспрессии генов, описанные ниже, были основаны на версии 2 тандемного дизайна GPC.

Затем мы протестировали тандемный GPCv2-Fluor, тандемную генную цепь GPC, которая последовательно экспрессирует четыре флуоресцентных белка в клетках HEK293T (рис. 2a). Тандемный GPCv2-Fluor состоит из GIB-Cre-BFP, ABA-Flp-GFP, GIB-PhiC31-mCherry и iRFP720 17 , так что чередование обработки с GA 4 , ABA и GA 4 вызывает последовательную экспрессию из BFP, GFP, mCherry и iRFP720.Все гены полезной нагрузки были помечены последовательностью PEST 18 для увеличения скорости их оборота, чтобы уровни флуоресценции более точно отражали экспрессию генов от каждого GPC. Транспозаза PiggyBac была использована для интеграции больших (> 15 т.п.н.) генных цепей в геномы хозяина млекопитающих 19 . Последовательная обработка GA 4 , ABA и GA 4 , каждый в течение 48 часов, вызвала каскад экспрессии гена

$$ {\ rm {BFP}} \ to {\ rm {GFP}} \ to {\ rm {mCherry}} \ to {\ rm {iRFP}} 720 $$

в 95% ячеек (рис.2б, в). Мы наблюдали, что небольшая (<10%) фракция клеток экспрессировала гены полезной нагрузки, запрограммированные на экспрессию на более поздних стадиях каскада. Эта экспрессия, вероятно, была связана с протекающей активностью расщепленных рекомбиназ в отсутствие лиганда. Соответственно, ПЦР-амплификация рубцовой последовательности выявила умеренную долю генной цепи на более поздних стадиях каскада, что указывает на неплотную рекомбиназную активность (дополнительный рис. 3b).

Мы дополнительно оценили устойчивость каскада экспрессии генов, изменив схему лечения лигандом или порядок обработки лигандом.Сначала мы проверили, сохраняют ли клетки, несущие тандем GPCv2-Fluor, память о конкретных стадиях каскада. Мы сделали это, обработав клетки GA 4 для переключения гена полезной нагрузки на GFP и затем поддерживая их в отсутствие лиганда CID в течение 8 дней. Более 80% клеток сохранили правильную память о стадии в каскаде; то есть они сохранили экспрессию GFP и способность переключать ген полезной нагрузки на mCherry в ответ на лечение ABA (дополнительный рис.2е). Мы наблюдали незначительное (<10%) снижение процента клеток GFP + и преждевременную экспрессию mCherry в отсутствие ABA. Точечные мутации, которые снижают тенденцию к спонтанному восстановлению расщепленных фрагментов рекомбиназы в отсутствие лиганда CID 20 , вероятно, еще больше уменьшат утечку и улучшат точность памяти. Мы также обрабатывали клетки, несущие тандемный GPCv2-Fluor, лигандами CID в другом временном порядке:

$$ {\ rm {ABA}} \ to {{\ rm {GA}}} _ {4} \ to {\ rm {ABA}} \ to {{\ rm {GA}}} _ {4} $$

Как и ожидалось, первоначальная обработка ABA не вызвала переключение гена полезной нагрузки и не нарушила способность тандема GPCv2-Fluor выполнять каскад экспрессии гена при последующей обработке GA 4 → ABA → GA 4 (рис.2г).

Тандемный GPC обеспечивает последовательную экспрессию и мутагенез

Помимо экспрессии генов, тандемные GPC могут использоваться для последовательной экспрессии sgRNA, чтобы использовать универсальность CRISPR-Cas9 для управления программами транскрипции (тандем GPCv2-CRISPRa) или последовательного редактирования генома (тандемное редактирование генома). GPCv2-CRISPR). Гены полезной нагрузки в GPC экспрессируются вместе с рекомбиназой из промотора РНК-полимеразы II; это контрастирует со стандартными промоторами РНК-полимеразы III, используемыми для управления экспрессией sgRNA в большинстве исследований.Таким образом, мы сравнили несколько стратегий 21,22,23,24 для экспрессии sgRNA, управляемой РНК-полимеразой II, путем фланкирования sgRNA последовательностями расщепления РНК, используя анализ, в котором sgRNA нацеливает dCas9-VPR на искусственный sgRNA-чувствительный промотор для индуцируют экспрессию mCherry (рис. 3а, слева) 25 . sgRNA, фланкированная 20nt ядерными последовательностями для Csy4-опосредованного расщепления («20nt core»), лишенная 8nt «handle» последовательности для сборки комплекса Cas 26 , привела к самой сильной экспрессии mCherry (рис.3а). Таким образом, в наших тандемных цепях GPCv2-CRISPRa и тандемных GPCv2-CRISPR, sgRNA фланкировалась этим 20nt ядром, чтобы индуцировать эффективное высвобождение sgRNA, в то время как оставшаяся мРНК, кодирующая рекомбиназу и лишенная поли-A-хвоста, была стабилизирована добавлением MALAT1 тройная спираль днРНК 27 . К каждому GPC был присоединен BGHpA на 3′-конце для предотвращения транскрипции GPC ниже по течению.

Фиг. 3: Последовательный каскад транскрипции и редактирование генов с помощью тандем-GPC-CRISPRa и тандем-GPC-CRISPR, соответственно.

a (слева) Схемы различных архитектур для РНК Pol II-управляемой экспрессии sgRNA и репортерной конструкции для активности sgRNA. (Справа) Активность репортера sgRNA RFP с указанным форматом sgRNA, управляемым РНК Pol II ( n = 2, значения указывают среднее значение). EF1ap: промотор EF1a человека, CMVmin: минимальный промотор CMV. b Схема тандема GPCv2-CRISPRa. c Количественная оценка генов-мишеней sgRNA после каждой указанной последовательности обработки лигандом ( n = 3, среднее ± s.д.). d Схема тандема GPCv2-CRISPR. e Подтверждение последовательных мутаций генов с использованием анализа эндонуклеаз Т7. Стрелки указывают на разрезанные полосы. Ожидаемая длина нерасщепленных и расщепленных полос указана под изображением геля. f Количественная оценка редактирования гена в e путем секвенирования следующего поколения (NGS) ( n = 3, среднее ± стандартное отклонение). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Затем мы внедрили оптимизированный тандем GPCv2-CRISPRa, который активирует транскрипционный каскад эндогенных генов RHOXF2 , ASCL1 , HBG1 и TTN при последовательной обработке GA 4 → ABA .Мы выбрали гены в транскрипционном каскаде, чтобы включить те, которые подтвердили sgRNAs, которые эффективно связываются и активируют интересующие промоторы 25,28 . Сначала мы исследовали кинетику распада sgRNA после обработки лигандом и удаления GPC, а также экспрессию полезной sgRNA в следующем GPC. С этой целью клетки HEK293T, несущие тандемную цепь GPCv2-CRISPRa, обрабатывали GA 4 . Затем мы измерили кинетику экспрессии RHOXF2 и ASCL1 , которые являются генами-мишенями sgRNA, экспрессируемыми в первом и втором GPC, соответственно.В соответствии с предыдущим отчетом об измерении периода полужизни sgRNA в клетках 29 , уровни экспрессии генов RHOXF2 и ASCL1 быстро изменились, приближаясь к равновесию к 96 часам (дополнительный рисунок 3). Поэтому мы обрабатывали клетки, несущие тандемный GPCv2-CRISPRa, лигандами CID в течение 96 часов для перехода между каждой стадией в этом каскаде. Как и ожидалось, тандем GPCv2-CRISPRa активировал транскрипционный каскад RHOXF2 , ASCL1 , HBG1 и TTN регулируемым во времени образом (рис.3б, в).

Мы аналогичным образом реализовали каскад экспрессии sgRNA для последовательной мутации нескольких генов с помощью Cas9, чтобы выделить потенциальные возможности использования этой генной цепи для моделирования многоступенчатой ​​природы туморогенеза 4 . С этой целью мы создали тандем GPCv2-CRISPR, схему, которая экспрессирует каскад sgRNA, чтобы нокаутировать ключевые гены-супрессоры опухолей при колоректальном раке. Эти гены, APC , MLh2 , SMAD4 и TP53 , как известно, подвергаются последовательным мутациям, вызывающим рак, 3 .Анализ эндонуклеазы T7 и анализ секвенирования следующего поколения показали, что последовательные индел-мутации запускаются в этих четырех генах в 54–89% клеток в ответ на правильную последовательность индукторов (Fig. 3d-f). Мы наблюдали небольшое отставание в редактировании генов (например, редактирование MLh2 между стадиями 2 и 3; редактирование SMAD4 между стадиями 3 и 4). Это отставание, вероятно, было связано с sgRNA, присутствующей во время удаления. Предполагается, что сгРНК будет генерировать индел-мутации до тех пор, пока не разложится, тем самым образуя дополнительные индел-мутации после удаления GPC.

Тандемный GPC обеспечивает возможность различных последовательных генетических событий в одной цепи.

Устойчивость каскадов экспрессии генов склонна к снижению по мере увеличения числа стадий в каскаде, поскольку рекомбиназы не эффективны на 100%. {{\ rm {R}}} — {\ rm {sgSMAD}} 4, $$

с сайтами AttP для интегразы PhiC31, размещенными на верхнем конце генной цепи (рис.4а). Эта универсальная генная цепь последовательно генерирует индел-мутации в локусах APC , MLh2 и SMAD4 , а затем путем отбора пуромицина синхронизирует клетки, которые находятся на определенной стадии (в данном случае — стадии 3). путем удаления любых клеток, которые находятся на других стадиях (в данном случае стадии 1 или 2) в каскаде экспрессии генов (рис. 4b). После синхронизации обработка GA 4 вызывает самоудаление генной цепи AttP-тандем GPCv2-CRISPR посредством рекомбинации интегразой PhiC31 для предотвращения любых дальнейших нежелательных мутаций.Мы подтвердили последовательное накопление индел-мутаций в целевых локусах sgRNA (рис. 4в, г). Путем количественной оценки рубцовой последовательности, фланкирующей сайт узнавания рекомбиназы самого проксимального GPC для каждой стадии (красная стрелка на рис. 4a), мы подсчитали, что ~ 79% клеток были синхронизированы на стадии 3 в каскаде экспрессии генов в ответ на селекция пуромицина (рис. 4д). Синхронизация удаляла клетки, у которых отсутствовали индел-мутации в трех локусах из-за неэффективности опосредованного рекомбиназой иссечения и последующего отказа каскада экспрессии генов.Вероятно, скорость синхронизации занижена из-за смещения ПЦР, которое преимущественно усиливает более короткий ампликон 30 . Поскольку последовательность рубца становится длиннее после каждой стадии (дополнительный рис. 2d), когда клетки на разных стадиях существуют как смесь, более короткая последовательность рубца, которая соответствует более ранней стадии в каскаде, будет предпочтительно амплифицироваться. Соответственно, секвенирование следующего поколения эквимолярной смеси плазмид, которые имеют ампликон рубцовой последовательности для каждой стадии, показало, что ампликон самой короткой рубцовой последовательности (156 п.н. на стадии 1) был перепредставлен на 2.72–2,84 раза по сравнению с другими ампликонами с более длинными рубцовыми последовательностями (195 и 198 п.н. на стадиях 2 и 3, соответственно) (дополнительный рис. 5). Кроме того, наличие нескольких копий генной цепи в клетке может мешать синхронизации. Поскольку одной копии генной цепи стадии 3, которая экспрессирует ген устойчивости к пуромицину, достаточно, чтобы пережить отбор пуромицина, пуромицин не устраняет цепь гена на других стадиях в каскаде, когда он находится в той же клетке, по крайней мере, с одной копией генной цепи стадии 3. .Мы использовали очень небольшое количество транспозонного вектора (см. Раздел «Методы»), чтобы ограничить количество копий генной цепи до одной копии на клетку. Количественный анализ ПЦР показал, что среднее число копий генной цепи было очень близко к единице (дополнительный рисунок 6). Однако небольшая часть клеток, содержащих несколько копий генной цепи, может помешать идеальной синхронизации генной цепи.

Рис. 4: Последовательное срабатывание, синхронизация и удаление генной цепи с помощью AttP-тандема GPCv2-CRISPR.Схема

a AttP-tandem GPCv2-CRISPR. Красные стрелки указывают на праймеры, используемые для амплификации рубцовой последовательности для идентификации стадии внутри каскада, используемого в e . Синие и зеленые стрелки указывают на праймеры, используемые для оценки удаления генной цепи в f . Красные стрелки указывают на праймеры, используемые для амплификации рубцовой последовательности, количественно определяемой в и . b Относительная жизнеспособность клеток при отборе пуромицина на определенных стадиях каскада ( n = 3, среднее ± с.д.). Данные нормализованы по жизнеспособности на стадии 3. c Подтверждение последовательных мутаций гена с использованием анализа эндонуклеазы Т7. Стрелки указывают на разрезанные полосы. Ожидаемые длины нерасщепленных и расщепленных полос такие же, как на рис. 3e. d Количественная оценка редактирования гена в c с помощью NGS ( n = 3, среднее ± стандартное отклонение). e NGS количественная оценка частотных рубцовых последовательностей, соответствующих каждой стадии в каскаде ( n = 3, среднее ± с.д.). f КПЦР проверка удаления генной цепи, оцениваемая по относительному количеству гена Cas9 в геномной ДНК, нормализованному к инвертированному концевому повтору (ITR) транспозона Piggybac ( n = 3, среднее ± стандартное отклонение). Статистический анализ с помощью двустороннего теста t . Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Результатом синхронизации явилось увеличение частот инделей для генов APC , MLh2 и SMAD4 с 28–62% до 46–84%.Наконец, активация GIB-PhiC удалила всю генную цепь в 78% клеток (рис. 4f), оставив клетки, которые имели специфические индел-мутации, но были лишены каких-либо экзогенных генов, включая Cas9, экспрессирующихся в генной цепи.

Кайл Хардинг фотографирует Красивую странность

В течение года Галерея 208 демонстрирует современные произведения искусства, которые включают в себя различные темы, техники выражения идей, стили от репрезентативной до необъективной абстракции, а также экспонаты, которые часто могут быть сложными.Тем не менее, у нас редко бывает выставка о красоте.

Красота, особенно если она связана с фигурой, может быть проблематичной темой: каждый из нас видит красоту по-своему, и изображения красоты рекламируются способами, которые приводят к стереотипам. И все же для человеческой психики по-прежнему важно испытывать красоту. Например, мы приветствуем красоту солнечного света после многих дней пасмурной и дождливой погоды.

Beautiful Strangeness: Photographs by Kyle Harding откроется 9 ноября в 17:30.м. в Галерее 208 и представляет собой выставку, которая исследует прекрасную странность ребенка, любого ребенка или наши собственные детские переживания. Задача Хардинга заключалась в том, чтобы позволить нам выйти за рамки семейного портрета и испытать универсальное время, которое должно было быть наполнено чудесами, тайнами и простыми удовольствиями в мельчайших событиях, обычных предметах и ​​повседневных делах.

Хардинг получила степень бакалавра изящных искусств в области художественного образования со специализацией в фотографии в Университете Восточной Каролины в 2008 году и получила степень магистра художественного образования в Университете Северной Каролины в Пембруке в 2017 году.Учитель государственной художественной школы, адъюнкт-факультет Государственного университета Фейетвилля, мать двоих маленьких детей, состоящая в браке с большой семьей родственников мужа, а также дочь и племянница своих ближайших родственников, Хардинг очень занятой человек.

Время от времени она находит время, чтобы сосредоточиться на том, что происходит во время ежедневных и нескончаемых переживаний, связанных с ее двумя маленькими дочерьми в качестве художника. Как художник она пытается заглянуть за семейное и запечатлеть универсальное.

После приглашения принять участие в биеннале художественного факультета 2021 года в галерее Розенталь в бывшем СССР, Хардинг поделилась следующим в своем заявлении художника: «Я выбрала предмет, который мне больше всего нравится в это время в моей жизни: мой четырехлетний ребенок. и 7-летние дочери.»Отобранные на выставке материалы являются частью более обширной работы по отражению универсальных тем, в которых участвуют мои дети: невинность, размышления, игра, надежда и уязвимость. В более широком контексте я надеюсь, что фотографии могут вызвать воспоминания для всех о том, что значит быть ребенком, и вспоминать странную красоту окружающего нас мира, когда мы были детьми ».

Одна из многих причин для посетителей посетить открытие Beautiful Strangeness в Галерее 208 — это встретиться с художником и насладиться тем, как фотография, сделанная арт-фотографом, может выйти за рамки предмета.Основная цель Хардинга — сделать художественное заявление с помощью фотографии — фотография используется как средство творческого самовыражения, выражения идеи, сообщения или эмоции.

Определение фотографии изобразительного искусства включает в себя воплощение видения, эмоций или душевного состояния через сфотографированное изображение.

Это включает создание чего-то, что раньше жило только в вашей голове, а не просто художественное запечатление того, что вы видите.

В Beautiful Strangeness Хардинг выбрал изображения из тех занятий, которые мы принимаем как должное, и увеличил кадрированные изображения, чтобы передать состояние души через сфотографированное изображение.

На фотографии «Три амигоса» зритель смотрит вниз на две пары маленьких босых лапок, стоящих на цементе, две передние лапы пятнистой короткошерстной собаки находятся между детьми.

Ноги детей запечатлены ниже колен и ниспадают на фото с верхнего края, как будто тонкие столбики с каждой стороны фото. Тонкие, но мускулистые передние лапы собаки объединены, чтобы создать повторяющиеся пары ног и ступней, все связаны каким-то неизвестным образом, но по отдельности закреплены на своем месте на цементе
.

В «Трех амиго», как и на остальных фотографиях на выставке, посетители будут наслаждаться тем, как острое или обостренное зрение Хардинга оживляет видение и душевные состояния через сфотографированное изображение.

Она успешно поделилась с нами способом увидеть мир, о котором мы, возможно, забыли, возможно.

В «Сэди в солнцезащитных очках» Хардинг сфотографировал крупным планом молодую Сэди в, казалось бы, больших солнцезащитных очках. Лицо расслабленное и почти невыразительное, глаза ребенка спрятаны.Детали волос, солнцезащитные очки и присборенная рубашка с принтом контрастируют с расфокусированным и минималистичным фоном. Гладкая поверхность кожи перекликается с минимализмом фонового тона, но при этом ярче — гладкая полнота молодости проявляется в естественной и свежей, объемной форме.

Хардинг включил в выставку только черно-белые фотографии по нескольким традиционным причинам. Цвет может отвлекать нас от того, о чем фотография. Когда вы удаляете цвет, акцент изображения смещается на другие композиционные элементы, такие как контраст, текстура, освещение и форма.Зрители видят уже не что-то знакомое по цвету, а иную версию реальности.

Один, в котором черно-белая фотография более интерпретируема.

Harding сочетает вышеупомянутые преимущества черно-белой фотографии с ее другим потенциалом кажущейся вневременности. Обрезая фигуры и часто показывая нам только части, она использовала фрагменты, чтобы предложить более крупную историю.

На каждой фотографии мы видим, как одна история символически перекрывается или разворачивается в другую.Каждая картина — это мимолетное воспоминание, сиюминутный опыт. Мы можем ощущать жизнь тех, кто запечатлен на фотографии, или вспоминать свою собственную жизнь как взаимосвязанные истории, которые мы, возможно, принимали как должное.

Harding возвращает нас в те моменты времени, фотография за фотографией.

Я уверен, что посетители выставки Beautiful Strangeness: Фотографии Кайла Хардинга покинут выставку более счастливыми, чем когда они прибыли в Галерею 208. Невозможно не улыбнуться, когда мы соединяемся с невинностью, радостью и надеждой.

Публику приглашают посетить открытие выставки Beautiful Strangeness: Photographs by Kyle Harding 9 ноября в галерее 208 с 17:30 до 19:00.

Галерея 208 находится по адресу Up and Coming Weekly , 208 Rowan Street в Фейетвилле, Северная Каролина.

Выставка продлится до конца декабря. Часы работы галереи: понедельник — четверг, 9.00 — 16.00. Для информации звоните 910-484-6200.

Danner — с 1932 г.

Danner — с 1932 г.

Магазин не будет работать корректно, если куки отключены.

Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript. Для наилучшего взаимодействия с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

Путешественники в стиле ретро

Современное исполнение сочетается с классикой старой школы.

Изображение пары зеленого и коричневого цвета, вдохновленное путешественниками 1980-х годов.

В Магазин

Водонепроницаемые сапоги

Готов к сезону дождей и не только.

Изображение человека, идущего по лужам в коричневых ботинках.

Магазин Водонепроницаемый

Сапоги для охоты, произведенные в США

Изготовлено вручную с особым качеством, восходит к 1932 году.

Изображение человека, завязывающего шнурки на коричневом кожаном охотничьем ботинке высотой 8 дюймов.

В Магазин

Комфорт круглосуточно

Штангенциркуль обеспечит вам поддержку в течение долгих дней на работе.

Изображение человека, скручивающего пожарный шланг, в коричневых рабочих ботинках.

Магазин суппортов

Рекрафтинговая служба

Мы делаем наши ботинки на долгие годы. Если вы носите их достаточно долго и усердно, скорее всего, им потребуется перешивка, новая подошва или восстановление кожи.

Крупным планом изображение человека, использующего станок для придания формы новой подошве использованного ботинка.

Узнать больше

Партнерские организации

Danner гордится тем, что поддерживает тех, кто прокладывает новые пути, чтобы обогатить жизнь других.

Старинная фотография альпинистов, отдыхающих на вершине горы.

Узнать больше

Каскад на средние волосы: плюсы, минусы, укладка — Стрижки

Поделиться

Штифт

Твитнуть

Отправить

Поделиться

Отправить

Вместе с модной современной каскадной стрижкой вы всегда будете в ногу с модой! Каскад волос способен творить чудеса с внешностью многих девушек! Стильная стрижка не только заметно выделит вас из общей серой массы, но и подчеркнет достоинства вашей внешности.С этой очаровательной стрижкой вы всегда почувствуете себя суперзвездой!

Удлиненные

Если пряди недостаточно толстые, объемные, стоит попробовать такую ​​прическу. Мастер подберет оптимальную длину, тщательно обработав слои многослойной стрижки. Пряди, ниспадающие до плеч, дадут ощущение длины, доходят до нижней линии скул — подчеркнут идеальную форму лица. Такая прическа никогда не потеряет актуальности. Удлиненный каскад на средние волосы подойдет женщинам с любым типом лица и прядей.Единственный ее недостаток — небрежно будет смотреться расколотые ослабленные кончики.

Асимметричная

Этот вариант стрижки имеет разную длину прядей с обеих сторон лица. Эта прическа рекомендуется молодым людям.

Для увеличения пышности прически применяют двухуровневую стрижку. При этом для каждого ряда используются наконечники филировки. Стилисты советуют применять такой вариант для прямых волос.

Заключение

Cascade — универсальный вариант укладки прически, который можно применять к разному типу внешности и одновременно выглядеть актуально и модно.Чтобы каскад держал форму, выглядел аккуратно, стилисты рекомендуют вовремя обновлять стрижку и использовать только качественные средства для ухода и укладки.

Поделиться

Штифт

Твитнуть

Отправить

Поделиться

Отправить

Посмотрите видео: Учебное пособие по стрижке — слои средней длины (ноябрь 2021 г.).

изображений: Cascade Help — Northwestern University

Images

Чтобы вставить изображение в область содержимого с помощью редактора WYSIWYG, выполните следующие действия:

  1. Перейдите на страницу, прокрутите до области содержимого, в которой вы хотите разместить изображение.
    На панели инструментов WYSIWYG найдите и щелкните значок Вставить / редактировать изображение . Откроется всплывающее окно.

  2. По умолчанию Image Source является внутренним, что означает, что изображения, которые использует ваш сайт, должны быть активными внутри Cascade. Мы не рекомендуем ссылаться на внешнее изображение.
  3. Второе поле, Image , позволяет выбрать желаемое изображение. Когда вы нажимаете на поле Изображение , открывается другое всплывающее окно сбоку (см. Снимок экрана ниже), которое позволяет вам: 1) Выбрать из недавно использованных изображений, или 2) Просмотрите , чтобы найти изображение в дереве папок, или 3) Загрузите со своего компьютера.Если вы выбрали загрузку изображения со своего компьютера, убедитесь, что папка для размещения — Images . Это гарантирует, что все файлы изображений будут сохранены в папке Images и их можно будет легко найти для дальнейшего использования.

  4. Следующее поле, Описание изображения , позволяет добавить альтернативный текст для изображения, который будет использоваться пользователями с ослабленным зрением. Вы можете установить флажок Декоративное изображение , если изображение является декоративным и не содержит никакой информации, связанной с содержимым.

  5. Затем отрегулируйте Размеры изображения, если хотите.
  6. Если вы хотите применить обтекание текстом к изображению, выберите один из двух вариантов выравнивания: align-image-left или align-image-right .

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *